hti熒光底物簡(jiǎn)介
haemtech基于 ANSN 的熒光底物
的一般結(jié)構(gòu)圖解了基于6-氨基-1-萘磺酰胺 (ANSN) 熒光底物的一般結(jié)構(gòu)。在本族化合物中，R1是COOH-末端殘基通常是精氨酸的三肽。R2和R3可以是氫、烷基、芳基或環(huán)烷基。虛線表示各種絲氨酸蛋白酶水解的位點(diǎn)。
含有熒光報(bào)告基團(tuán) 6-amino-1-naphthalene-sulfonamide (ANSN) 的底物是監(jiān)測(cè)各種絲氨酸蛋白酶的酶活性的有用化合物 (1-12)。在此類(lèi)化合物中，ANSN 報(bào)告基團(tuán)與短的三肽序列相連（在 R1 位置）。肽序列旨在優(yōu)化酶和底物之間的相互作用?？梢蕴砑拥?R2 和 R3 位置的其他成分反映了 P' 亞位點(diǎn)位置的變化，并且通常會(huì)影響底物的動(dòng)力學(xué)參數(shù)。作為有效底物的化合物在三肽和 ANSN 基團(tuán)之間水解。一旦從肽部分切下，ANSN 基團(tuán)的相對(duì)熒光就會(huì)增加約 1000 倍。
下頁(yè)確定的動(dòng)力學(xué)特性將有助于選擇合適的底物。已證明 ANSN 底物對(duì)因子 VIIa (1-5,7,9,10,12) 的分析特別有用。盡管單獨(dú)的因子 VIIa 的底物水解速率相對(duì)較慢，但當(dāng)組織因子加入分析系統(tǒng)時(shí)，幾種化合物（例如化合物 SN-17a）的 kcat 會(huì)發(fā)生很大變化。
使用信息：
基于 ANSN 的底物以 DMSO 中的 10 mM 儲(chǔ)備溶液形式提供，通常可用于分析 400 nM 至低至 50pM 濃度范圍內(nèi)的酶。ANSN 底物通常以 50 到 100 µM 的最終濃度使用，并且可以在大多數(shù)生理緩沖液（即 TBS、HBS、PBS 等）中稀釋到該最終濃度。反應(yīng)（熒光的相對(duì)變化）可以使用標(biāo)準(zhǔn)熒光計(jì)或熒光讀板器進(jìn)行監(jiān)測(cè)。動(dòng)力學(xué)或終點(diǎn)模式可與設(shè)置在以下波長(zhǎng)（激發(fā)=352nm，發(fā)射=470nm）的儀器一起使用。通過(guò)在發(fā)射光束中使用 390 到 450 nm 長(zhǎng)通截止濾波器，可以最大限度地減少光偽影。
下表列出了每種底物的動(dòng)力學(xué)特性，表下方列出了期刊參考文獻(xiàn)列表以作為使用示例。
DMSO 中的儲(chǔ)備底物溶液應(yīng)在 4°C 或更低的溫度下冷凍儲(chǔ)存，并應(yīng)避光。在這些條件下，化合物將保持穩(wěn)定超過(guò)一年。
**下表的關(guān)鍵字：K m = µM；k貓= s -1 ; k cat /K m = M -1 s -1 x 10 -5 ; ND=未確定
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| 結(jié)構(gòu) | D-AFK-ANSNH-iC 4 H 9 .2HBr |
|---|
| 對(duì)...有用 | 對(duì)纖溶酶有用 |
|---|
| 動(dòng)力學(xué)特性 | Ⅱa | VIIa | VIIa/TF | Xa | 夏 | 個(gè)人電腦 | 多巴胺 | 纖溶酶 |
|---|
| ?中號(hào) | ND | ND | ND | ND | ND | ND | ND | 130 |
| K貓 | ND | ND | ND | ND | ND | ND | ND | 3.7 |
| K貓/K M | ND | ND | ND | ND | ND | ND | ND | 0.28 |
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| 結(jié)構(gòu) | Mes-D-LGR-ANSN(C 2 H 5 ) 2 |
|---|
| 對(duì)...有用 | 對(duì)因子 Xa 有用 |
|---|
| 動(dòng)力學(xué)特性 | Ⅱa | VIIa | VIIa/TF | Xa | 夏 | 個(gè)人電腦 | 多巴胺 | 纖溶酶 |
|---|
| ?中號(hào) | 31 | 180 | 200 | 125 | 580 | 113 | ND | ND |
| K貓 | 0.63 | 0.007 | 0.79 | 36 | 15 | 0.055 | ND | ND |
| K貓/K M | 0.2 | ND | 0.04 | 2.9 | 0.26 | 0.005 | ND | ND |
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| 結(jié)構(gòu) | D-LPR-ANSNH-C 3 H 7 • 2 HCl |
|---|
| 對(duì)...有用 | 對(duì)因子 XIa 有用 |
|---|
| 動(dòng)力學(xué)特性 | Ⅱa | VIIa | VIIa/TF | Xa | 夏 | 個(gè)人電腦 | 多巴胺 | 纖溶酶 |
|---|
| ?中號(hào) | 0.5 | 300 | 300 | 171 | 75 | 45 | 98 | ND |
| K貓 | 19 | 0.07 | 4.5 | 3.3 | 53 | 52 | 0.31 | ND |
| K貓/K M | 380 | 0.002 | 0.15 | 0.19 | 7.1 | 12 | 0.03 | ND |
價(jià)格：請(qǐng)?jiān)儍r(jià)
| 結(jié)構(gòu) | D-FPR-ANSNH-C 6 H 11 • 2 HCl |
|---|
| 對(duì)...有用 | 對(duì)凝血酶和 VIIa 有用 |
|---|
| 動(dòng)力學(xué)特性 | Ⅱa | VIIa | VIIa/TF | Xa | 夏 | 個(gè)人電腦 | 多巴胺 | 纖溶酶 |
|---|
| ?中號(hào) | 0.4 | 150 | 330 | 150 | ND | 7.8 | 36 | ND |
| K貓 | 17 | 0.05 | 8.4 | 0.32 | ND | 6.6 | 0.074 | ND |
| K貓/K M | 430 | 0.004 | 0.25 | 0.02 | ND | 8.6 | 0.02 | ND |
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| 結(jié)構(gòu) | D-FPR-ANSNH-C 4 H 9 • 2 HCl |
|---|
| 對(duì)...有用 | 對(duì)因子 VIIa 有用 |
|---|
| 動(dòng)力學(xué)特性 | Ⅱa | VIIa | VIIa/TF | Xa | 夏 | 個(gè)人電腦 | 多巴胺 | 纖溶酶 |
|---|
| ?中號(hào) | ND | 186 | 102 | ND | ND | 53 | ND | ND |
| K貓 | ND | 0.11 | 2.7 | ND | ND | 21 | ND | ND |
| K貓/K M | ND | 0.006 | 0.26 | ND | ND | 4 | ND | ND |
價(jià)格：請(qǐng)?jiān)儍r(jià)
| 結(jié)構(gòu) | Boc-L-(pF)FPR-ANSNH-C 2 H 5 |
|---|
| 對(duì)...有用 | 對(duì) tPA 有用 |
|---|
| 動(dòng)力學(xué)特性 | Ⅱa | VIIa | VIIa/TF | Xa | 夏 | 個(gè)人電腦 | 多巴胺 | 纖溶酶 |
|---|
| ?中號(hào) | 3.7 | 50 | 217 | ND | ND | ND | 71 | ND |
| K貓 | 44 | 0.008 | 0.88 | ND | ND | ND | 1.03 | ND |
| K貓/K M | 120 | 0.002 | 0.04 | ND | ND | ND | 0.15 | ND |
價(jià)格：請(qǐng)?jiān)儍r(jià)
| 結(jié)構(gòu) | Boc-L-FPR-ANSNH-C 2 H 5 |
|---|
| 對(duì)...有用 | 對(duì)凝血酶有用 |
|---|
| 動(dòng)力學(xué)特性 | Ⅱa | VIIa | VIIa/TF | Xa | 夏 | 個(gè)人電腦 | 多巴胺 | 纖溶酶 |
|---|
| ?中號(hào) | 17 | ND | ND | 100 | ND | 540 | 47 | ND |
| K貓 | 58 | ND | ND | 0.31 | ND | 2.2 | 0.011 | ND |
| K貓/K M | 34 | ND | ND | 0.003 | ND | 0.04 | 0.002 | ND |
價(jià)格：請(qǐng)?jiān)儍r(jià)
| 結(jié)構(gòu) | L-EGR-ANSNH-C 3 H 7 • 2 HBr |
|---|
| 對(duì)...有用 | 對(duì)因子 XIa 有用 |
|---|
| 動(dòng)力學(xué)特性 | Ⅱa | VIIa | VIIa/TF | Xa | 夏 | 個(gè)人電腦 | 多巴胺 | 纖溶酶 |
|---|
| ?中號(hào) | 100 | ND | ND | 110 | 225 | 440 | ND | ND |
| K貓 | 2.5 | ND | ND | 0.2 | 82 | 17 | ND | ND |
| K貓/K M | 0.25 | ND | ND | 0.02 | 3.6 | 0.39 | ND | ND |
價(jià)格：請(qǐng)?jiān)儍r(jià)
| 結(jié)構(gòu) | BOC-D-VLR-ANSNH-C 4 H 9 |
|---|
| 對(duì)...有用 | 對(duì) aPC 有用 |
|---|
| 動(dòng)力學(xué)特性 | Ⅱa | VIIa | VIIa/TF | Xa | 夏 | 個(gè)人電腦 | 多巴胺 | 纖溶酶 |
|---|
| ?中號(hào) | 19 | 42 | 170 | 19 | ND | 3.9 | ND | ND |
| K貓 | 0.055 | 0.007 | 1.6 | 0.055 | ND | 2.1 | ND | ND |
| K貓/K M | 0.03 | 0.002 | 0.09 | 0.03 | ND | 5.2 | ND | ND |
價(jià)格：請(qǐng)?jiān)儍r(jià)
| 結(jié)構(gòu) | D-VPR-ANSNH-C 4 H 9 • 2 HCl |
|---|
| 對(duì)...有用 | 對(duì)凝血酶和 aPC 有用 |
|---|
| 動(dòng)力學(xué)特性 | Ⅱa | VIIa | VIIa/TF | Xa | 夏 | 個(gè)人電腦 | 多巴胺 | 纖溶酶 |
|---|
| ?中號(hào) | 2 | 89 | 52 | 160 | 520 | 54 | 110 | ND |
| K貓 | 110 | 0.019 | 0.76 | 3.3 | 92 | 72 | 0.71 | ND |
| K貓/K M | 550 | 0.002 | 0.14 | 0.21 | 1.8 | 13 | 0.065 | ND |
